1. Samples were homogenized with 1mL methanol and extracted for 1 h at on ice.
2. Homogenates were centrifuged (7000 rpm, 4 ◦C, 5min).
3. Supernatant was diluted with 10 volumes of water adjusted to pH 3.0 with 0.1N HCl.
4. Samples were applied to preconditioned (20mL of methanol and 20mL of water) C18 Sep-Pak cartridges (500mg, Waters, Millford, MA, USA).
5. Cartridge was washed with 20mL of water to exclude nonvolatile ions followed by 10mL of hexane to exclude cholesterols and neutral lipids.
6. Samples were eluted with 10mL of methyl formate to obtain oxidized fatty acids and 10mL of methanol to obtain oxidized phospholipids, successively.
7. Lipid extracts were dried under a gentle stream of nitrogen, dissolved in 1mL of methanol, and stored at −80 ◦C until use.

1. 組織をメタノール 1mL でホモジナイズ、氷上で1時間放置し脂質を抽出
2. 遠心分離 (7000 rpm, 4 ◦C, 5min)
3. 上清を 0.1N HClでpH 3.0に調整した10倍量の水で希釈
4. メタノール20mL 次いで水20mL で洗浄したC18 Sep-Pak カートリッジ (500mg, Waters, Millford, MA, USA)にサンプルを注入
5. 水20mLでカートリッジに残るイオンを洗浄、ヘキサン10mLでコレステロールと中性脂質を除く
6. ギ酸メチル10mLで酸化脂肪酸を溶出、メタノール10mL で酸化リン脂質を溶出
7. 脂質を窒素ガス下で乾固、メタノール1mLに溶解、 −80 ◦C で保管

生体内で微量にしか存在しない酸化脂質の測定には、この三連四重極型でのみ行うことができるMS/MS法の一種で、親イオンと特徴的なプロダクトイオンの組み合わせで分子特異的に検出するmultiple reaction monitoring (MRM)を用いる。左図に示したように、三連四重極型はQ1、 Q2、 Q3と書いた3つの四重極を持ち、主にQ1で親イオンを測定し、Q2で目的とする親イオンを破壊し、生成したプロダクトイオンをQ3で測定する。例えば、エイコサペンタエン酸（EPA）のモノヒドロキシ体の一つである5-HEPEを測定するには、親イオン317（Q1）と特徴的なプロダクトイオン115（Q3）の組み合わせを用いることで特異的に測定することができる。